影響ELISA實(shí)驗的部分因素

                                                                        影響ELISA實(shí)驗的部分因素

     目前，病毒性疾病的診斷主要依賴(lài)對其抗原或是抗體的檢測，國內使用zui多的就是酶聯(lián)免疫吸附法實(shí)驗，酶免實(shí)驗靈敏度較高。但是如何保證結果的，結合實(shí)驗人員實(shí)際操作，對影響酶免檢測結果的因素粗略的分析一下。

一 試劑盒的選擇

   時(shí)機和質(zhì)量直接影響到結果的準確性。目前國內試劑盒與國外的質(zhì)量相差不大，94年起國家對體外診斷試劑統一實(shí)行批批檢測。我們的經(jīng)驗是根據同行對試劑盒的使用滿(mǎn)意度，部分根據衛生部檢測中心對參加室間質(zhì)評實(shí)驗室的試劑盒使用情況綜合評價(jià)。

通常試劑盒的效期是根據酶結合物的穩定性確定。這是試劑的核心組份，要防止反復的劇烈溫差變化，取用時(shí)的原則“即取即用”減少酶的失活，或者直接采購小包裝的試劑盒。

二標本

標本質(zhì)量的好壞直接影響到結果的準確性，目前實(shí)驗室zui常用的標本為血清。首先家養一定要在血塊完全收縮分離后進(jìn)行，否則纖維蛋白容易吸附孔底導致假陽(yáng)性結果。溶血對酶免實(shí)驗結果也會(huì )有較大影響。在標本采集時(shí)用玻璃試管采集，有報道塑料試管存放，進(jìn)行乙肝兩對半檢測。結果4H后明顯偏低，這是因為聚乙烯有吸附抗原或抗體蛋白，但是目前大多數的實(shí)驗室免疫項目并非每天都做，比如乙肝兩對半抗HCV等。

三 加樣稀釋

   我國大多數抗HCV等試驗標本只有10μl  10%的誤差。以2μl/L HBsAg質(zhì)控血清進(jìn)行試驗，加量分別為50μl 45μl，其余條件一致，測定結果吸光度分別為0.405±0.026和0.288±0.047.因此，移液器的準確性需要進(jìn)行校驗。zui好使用進(jìn)口移液器，同時(shí)移液器，移液器要與吸頭連接緊密。

   關(guān)于稀釋劑，媒介和物的家主，國內也有部分使用滴瓶滴加，但是加液兩不夠準確會(huì )造成稀釋倍數的差距。建議使用移液器加注。

四 育溫

通常在37度的水浴箱中完成，水浴箱的溫度指示為水的溫度，不過(guò)要值得注意的是不能將反應板放在試管架上，要是反應板飄浮在水面上稍高出試管架，箱蓋不能時(shí)常打開(kāi)，保持箱內的溫度恒定，相反的情況容易假陽(yáng)性結果。

五洗版

   zui好選擇手動(dòng)洗版，手工法洗版每洗一次在吸水紙上拍干一般都能保證洗版效果。

六顯色

   國內酶聯(lián)免疫試劑盒的色源底一般分為AB兩種液體。由于兩種液體不穩定，使用保存不當容易產(chǎn)生顏色，發(fā)現有顏色必須丟棄，顯色時(shí)加入A液后加B液。過(guò)程按照說(shuō)明書(shū)嚴格執行。否則隨著(zhù)時(shí)間的延長(cháng)吸光度會(huì )下降出現假陽(yáng)性發(fā)生。

原創(chuàng )作者：青島捷世康生物科技有限公司