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堿性磷酸酶染色液

點(diǎn)擊次數：4333　日期：2019/6/12 14:38:34

堿性磷酸酶染色液
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
     堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase，簡(jiǎn)稱(chēng)ALP或AKP)為一類(lèi)磷酸酯酶，廣泛分布于哺乳動(dòng)物組織內，其活性所需最適pH9.2~9.8。此酶主要存在于物質(zhì)交換活躍之處(細胞膜)，如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細膽管膜以及微動(dòng)脈和毛細血管動(dòng)脈部之內皮，還見(jiàn)于內質(zhì)網(wǎng)、高爾基復合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細胞之中性顆粒以及平滑肌之細胞膜。
     堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯(lián)法)不是采用金屬沉淀法來(lái)顯示堿性磷酸酶活性，而是采用偶氮偶聯(lián)法(又稱(chēng)同時(shí)偶聯(lián)法)，其原理是在pH9.2～9.8的堿性條件下細胞內堿性磷酸酶可使 AS-BI 磷酸鹽水解，釋放出磷酸與萘酚，后者與偶聯(lián)重氮鹽生成有色產(chǎn)物，定位于細胞質(zhì)中，該染液可用于血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片、梯度入水后的石蠟切片等的堿性磷酸酶染色, 堿性磷酸酶活性部位呈藍色，位于胞槳，結果較金屬鹽沉淀法可靠。
產(chǎn)品組成：
產(chǎn)品
3*10ml
 3*20ml
Storage
試劑(A):ALP固定液
100ml
20ml
RT 避光
試劑(B): ALP 孵育液
B1:AS-BI染色液
3*2ml
5*2ml
-20℃避光
B2:FBB染色液
5ml
10ml
4℃避光
臨用前，按 B1:B2=1:1 比例混合，即為 ALP 孵育液，即配即用。
試劑(C):核固紅染色液
10ml
20ml
4℃避光
使用說(shuō)明書(shū)
         1份
自備材料：
1、載玻片、濕盒
2、顯微鏡
3、4%多聚甲醛固定液(備選)
操作步驟(僅供參考)：
1、血液、骨髓或細胞涂片、冰凍切片、石蠟切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蠟切片無(wú)需固定)，水洗。
2、滴加配制好的 ALP 孵育液，放入濕盒中避光孵育15～20min，水洗。
3、入核固紅染色液復染 3～5min。
4、水洗、鏡檢或甘油明膠封固后鏡檢。
(二) 貼壁培養細胞
1、取6孔板或其他容器培養的細胞，棄液，PBS清洗干凈。
2、加4%多聚甲醛固定10～20min，PBS 清洗。
3、滴加配制好的ALP孵育液，放入濕盒中避光孵育15～20min，PBS清洗。
4、入核固紅染色液復染0.5～3min。
5、PBS 清洗、鏡檢。
染色結果：
ALP 活性部位
藍色
細胞核
紅色(核固紅)或綠色(甲基綠)
 
血液、骨髓涂片結果判斷：
一般以積分報告結果，根據100個(gè)中性粒細胞陽(yáng)性顆粒進(jìn)行 0～4+計分。
細胞分值
染色特點(diǎn)
0
無(wú)顆粒
1
稍有顆粒
2
中等程度顆粒
3
多數顆粒
4
充滿(mǎn)顆粒
臨床意義：
1、類(lèi)白血病反應積分明顯增高，未經(jīng)治療的慢性粒細胞白血病積分明顯減低。
2、急性細菌性感染積分明顯增高，病毒性感染積分多正�；驕p低。
3、再生障礙性貧血積分常增高，PNH、MDS 積分常減低。
注意事項：
1、AS-BI 染色液易失效，應避免反復凍融，臨用前低溫緩慢溶解，不可用溫水或熱水助溶。
2、ALP 孵育液易失效或降低陽(yáng)性強度，即配即用，不宜久置。
3、血液或骨髓細胞涂片或其他樣本均應新鮮，薄厚適宜，及時(shí)固定，否則會(huì )影響酶的活性。
4、培養細胞染色操作過(guò)程中，清洗、染色等步驟都應輕微，以免損傷或丟失細胞。
5、培養細胞或細胞爬片染色建議采用 4%多聚甲醛固定液，ALP 固定液更適用于血液或骨
髓細胞圖片的固定，染色時(shí)間應根據具體細胞特性而異。
有效期：12個(gè)月有效。

原創(chuàng )作者：青島捷世康生物科技有限公司

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